Base nutritiva para preparação de meios com sangue e meios seletivos, indicada para isolamento de microrganismos a partir de amostras clínicas. Desenvolvida a partir do trabalho de Ellner et al., promove morfologia colonial típica, melhor produção de pigmento e reações hemolíticas bem definidas. O sangue de carneiro adicionado permite detectar hemólise e fornece o fator X (heme); como a base não fornece o fator V (NAD), Haemophilus influenzae não cresce sem suplemento de V.

Com bacitracina, o Columbia enriquecido torna-se seletivo para Haemophilus (amostras do trato respiratório superior). Com soro estéril, pode ser utilizado no teste de virulência de Corynebacterium diphtheriae (linhas de precipitação toxina–antitoxina em ~48 h). Muitos patógenos se beneficiam de atmosfera com 3–10% de CO₂.

Principais aplicações

• Meio com sangue (ex.: 5% de sangue desfibrinado de carneiro) para isolamento primário e leitura de hemólise.
• Base para Chocolate Agar (10% sangue; aquecimento controlado), com opção de tornar-se seletivo pela adição de antimicrobianos.
• Formulações seletivas com suplementos para Brucella, Campylobacter, Gardnerella e cocos (Staphylococcus/Streptococcus).

Composição (g/L)

• Peptone, special – 23,0
• Corn starch – 1,0
• Sodium chloride – 5,0
• Agar – 15,0

Princípio: a peptona especial sustenta crescimento rápido e exuberante de microrganismos fastidiosos e não fastidiosos; o amido de milho serve como fonte de energia e neutraliza metabólitos tóxicos.

Como preparar (passo a passo)

1. Base

   • Dissolver 44,0 g em 1000 mL de água purificada/destilada.
   • Aquecer até ebulição para dissolver completamente.
   • Autoclavar a 121 °C (15 psi) por 15 min.
   • Resfriar a 45–50 °C antes de adicionar componentes termo-sensíveis.

2. Blood Agar

   • Adicionar 5% v/v de sangue desfibrinado de carneiro estéril à base estéril e fria.

3. Chocolate Agar

   • Adicionar 10% v/v de sangue desfibrinado de carneiro estéril à base estéril e fria.
   • Aquecer a 80 °C por 10 min, com agitação constante.
   • Opcional: tornar seletivo com antimicrobianos adicionados à base estéril.

Formulações seletivas (suplementos & atmosfera)

• Brucella spp.

  • Reconstituir 1 frasco de Brucella Selective Supplement e adicionar a 500 mL de base estéril fundida.
  • Precaução: culturas altamente infectantes; incubar em 5–10% CO₂.

• Campylobacter spp.

  • Adicionar a 500 mL da base um dos suplementos (Blaser-Wang, Butzler, Skirrow, Campylobacter Selective ou Supplement VI/Butzler) + 1 frasco de Campylobacter Growth Supplement + 5–7% v/v de sangue de cavalo ou carneiro.
  • Melhor desempenho a 42 °C em microaerofilia.

• Gardnerella spp.

  • Adicionar 1 frasco de G. vaginalis Selective Supplement a 500 mL de base estéril fundida.
  • Incubar a 35 °C por 48 h em 7% CO₂.

• Cocos (Staphylococcus/Streptococcus)

  • Adicionar 1 frasco de Staph-Strepto Supplement ou Strepto Supplement ou Streptococcus Selective Supplement a 500 mL da base estéril fundida.

Atmosfera/CO₂ (uso geral): muitos patógenos requerem 3–10% CO₂; ajuste conforme o microrganismo ou suplemento.

Controle de Qualidade (QC)

Aparência do pó: creme a amarelo, homogêneo, livre-escoante.

Aparência do meio preparado:

• Basal: gel âmbar claro, claro a ligeiramente opalescente.
• Com 5% p/v de sangue desfibrinado: gel vermelho-cereja opaco (placas).

pH (25 °C): 7,3 ± 0,2.

Desempenho com 5% de sangue (interpretação após incubação)

Embalagem

• Frascos de 500 g.

Armazenamento e validade

• Pó desidratado (higroscópico): armazenar em local seco, recipiente bem fechado, a 25–30 °C, protegido da luz solar direta.
• Validade: até 4 anos em condições ideais.
• Ao primeiro uso, anotar data e hora no rótulo; após retirar a quantidade desejada, fechar imediatamente